Snake venom befettet enzymen dy't carboxyl ester obligaasjes hydrolysearje.De substraten foar hydrolyse binne fosfolipiden, acetylcholine en aromaatyske acetate.Dizze enzymen omfetsje trije soarten: fosfolipase, acetylcholinesterase en aromaatyske esterase.Arginine esterase yn slangegif kin ek syntetyske arginine of lysine hydrolysearje, mar it hydrolyseart benammen proteïnepeptide-obligaasjes yn 'e natuer, sadat it heart ta protease.De enzymen dy't hjir besprutsen binne hannelje allinich op estersubstraten en kinne net hannelje op elke peptidebân.Under dizze enzymen binne de biologyske funksjes fan acetylcholinesterase en phospholipase wichtiger en binne folslein studearre.Guon slangegifen hawwe sterke aromaatyske esterase-aktiviteit, dy't p-nitrophenyl-ethylester, in - of P-naftaleenacetat en indole-ethylester kinne hydrolysearje.It is noch ûnbekend oft dizze aktiviteit wurdt produsearre troch in ûnôfhinklik enzyme of in bekende side-effekt fan carboxylesterase, lit stean syn biologyske betsjutting.Doe't it gif fan Agkistrodon halys Japonicus reagearre waard mei p-nitrophenyl ethyl ester en indole ethyl ester, de hydrolysates fan p-nitrophenol en indole phenol waarden net fûn;Krektoarsom, as dizze esters reagearje mei cobra Zhoushan ûndersoarten slangegif en Bungarus multicinctus slangegif, wurde se gau hydrolysearre.It is bekend dat dizze kobra-gifen sterke cholinesterase-aktiviteit hawwe, dy't ferantwurdlik wêze kinne foar hydrolyse fan 'e boppesteande substraten.In feite, Mclean et al.(1971) rapportearre dat in protte slangegif dy't ta de Cobra-famylje hearre kinne indol-ethylester, naftaleen-ethylester en butylnaftaleenester hydrolysearje.Dizze slangegif komt fan: kobra, swarte nekke kobra, swarte lippe kobra, gouden kobra, Egyptyske kobra, kening kobra, gouden kobra mamba, swarte mamba en wite lipped mamba (D. aw kent noch eastlike rhombola-rattelslangen)
It slangegif kin methylindole-ethylester hydrolysearje, dat is it substraat foar it bepalen fan de cholinesterase-aktiviteit yn serum, mar dit slanggif lit gjin cholinesterase-aktiviteit sjen.Dit lit sjen dat der in ûnbekende esterase yn kobra-gif is, dy't oars is as cholinesterase.Om de aard fan dit enzyme te begripen, is fierder skiedingswurk nedich.
1, fosfolipase A2
(I) Oersjoch
Phospholipase is in enzyme dat glycerylfosfaat kin hydrolysearje.D'r binne 5 soarten fosfolipase yn 'e natuer, nammentlik fosfolipase A2 en fosfolipase
A. , phospholipase B, phospholipase C en phospholipase D. It slangegif befettet benammen phospholipase A2 (PLA2), in pear slangegifen befetsje phospholipase B, en oare phospholipases wurde benammen fûn yn dierlike weefsels en baktearjes.Fig. 3-11-4 toant de aksje site fan dizze phospholipases op substraat hydrolyse.
Under phospholipases is PLA2 mear studearre.It kin it meast studearre enzyme wêze yn slanggif.It substraat is de esterbân op 'e twadde posysje fan Sn-3-glycerofosfaat.Dit enzyme wurdt in protte fûn yn slangegif, bijengif, skorpioengif en dierlike weefsels, en PLA2 is oerfloedich yn fjouwer famyljeslangegif.Om't dit enzym reade bloedsellen brekt en hemolyse feroarsake, wurdt it ek wol "hemolysin" neamd.Guon minsken neame ek PLA2 hemolytyske lecithinase.
Ludeeke fûn earst dat slangegif in hemolytyske ferbining kin produsearje troch te hanneljen op lecithine troch enzymen.Later, Delezenne et al.bewiisd dat as cobra venom hannelet op hynder serum of djerre, it foarmet in hemolytic stof.It is no bekend dat PLA2 direkt kin hannelje op 'e fosfolipiden fan' e erytrocyte membraan, it ferneatigjen fan 'e struktuer fan' e erytrocyte membraan en feroarsake direkte hemolysis;It kin ek hannelje op serum of tafoege lecithine om hemolytyske lecithine te produsearjen, dy't wurket op reade bloedsellen om yndirekte hemolyse te produsearjen.Hoewol PLA2 oerfloedich is yn 'e fjouwer famyljes fan slangegiften, is de ynhâld fan enzymen yn ferskate slangegif wat oars.Rattlesnake (C
Snake venom liet allinich swakke PLA2-aktiviteit sjen.Tabel 3-11-11 yllustrearret de fergeliking fan PLA2-aktiviteit fan 10 grutte giften fan giftige slangen yn Sina.
Tabel 3-11-11 Fergeliking fan phospholipase VIII-aktiviteiten fan 10 slangegif yn Sina
Snake venom
Fet frijlitting
Aliphatic acid,
Cjumol/mg)
Hemolytyske aktiviteit CHU50/^ g * ml)
Snake venom
Release fatty soeren
(^raol/mg)
Hemolytyske aktiviteit "(HU50/ftg * 1111)
Najanaja atra
9. 62
alve
Micracephal ophis
fiif punt ien nul
kalyspallas
8. 68
twa tûzen en achthûndert
gracilis
v, akte
7. 56
*** #
Ophiophagus hannah
trije punten acht twa
hûndert en fjirtich
Bnugarus fasctatus
7,56
twahûndert en tachtich
B. multicinctus
ien punt njoggen seis
twahûndert en tachtich
Viper en russelli
sân punten nul trije
T, mucrosquamatus
ien punt acht fiif
Siamensis
T. stejnegeri
0. 97
（2） Skieding en suvering
De ynhâld fan PLA2 yn slangegif is grut, en it is stabyl foar waarmte, soer, alkali en denaturant, sadat it maklik is om PLA2 te suverjen en te skieden.De mienskiplike metoade is om earst gelfiltraasje út te fieren op it rûge gif, dan ionútwikselingchromatografy út te fieren, en de folgjende stap kin wurde werhelle.Dêrby moat opmurken wurde dat de freeze-droeging fan PLA2 nei ion-útwikseling chromatography moat net feroarsaakje aggregaasje, omdat it freeze-droege proses faak fergruttet de ionyske sterkte yn it systeem, dat is in wichtige faktor wêrtroch aggregaasje fan PLA2.Neist de boppesteande algemiene metoaden binne ek de folgjende metoaden oannaam: ① Wells et al.② De substraatanalog fan PLA2 waard brûkt as ligand foar affiniteitschromatografy.Dizze ligand kin bine oan PLA2 yn slanggif mei Ca2+.EDTA wurdt meast brûkt as eluent.Neidat Ca2+ is fuorthelle, nimt de affiniteit tusken PLA2 en ligand ôf, en it kin dissosjearre wurde fan ligand.Oaren brûke 30% organyske oplossing of 6mol / L urea as eluent.③ Hydrofobe chromatografy waard útfierd mei PheiiylSephar0SeCL-4B om spoar PLA2 yn cardiotoxine te ferwiderjen.④ Anti-PLA2-antylichem waard brûkt as ligand om affiniteitschromatografy út te fieren op PLA2.
Oant no ta is in grut oantal slangegif PLAZ suvere.Tu et al.(1977) listed PLA2 suvere út slangegif foar 1975. Yn de lêste jierren, in grut oantal artikels oer skieding en suvering fan PLA2 binne rapportearre alle jierren.Hjir rjochtsje wy ús op 'e skieding en suvering fan PLA troch Sineeske gelearden.
Chen Yuancong et al.(1981) skieden trije PLA2-soarten fan it gif fan Agkistrodon halys Pallas yn Zhejiang, dat kin wurde ferdield yn soere, neutraal en alkaline PLA2 neffens har isoelektryske punten.Neffens syn toxicity, neutraal PLA2 is mear toxic, dat is identifisearre as presynaptic neurotoxine Agkistrodotoxin.Alkaline PLA2 is minder giftig, en soere PLA2 hat hast gjin toxiciteit.Wu Xiangfu et al.(1984) fergelike de skaaimerken fan trije PLA2s, ynklusyf molekulêre gewicht, amino acid gearstalling, N-terminal, isoelektrysk punt, termyske stabiliteit, enzyme aktiviteit, toxicity en hemolytic aktiviteit.De resultaten lieten sjen dat se ferlykber molekulêre gewicht en thermyske stabiliteit hienen, mar signifikante ferskillen yn oare aspekten.Yn it aspekt fan enzymaktiviteit wie soere enzymaktiviteit heger as alkaline enzymaktiviteit;It hemolytyske effekt fan alkaline enzyme op reade bloedsellen fan rotten wie it sterkst, folge troch neutraal enzyme, en soere enzyme amper hemolysearre.Dêrom wurdt spekulearre dat it hemolytyske effekt fan PLAZ is relatearre oan de lading fan PLA2-molekule.Zhang Jingkang et al.(1981) hawwe makke Agkistrodotoxin kristallen.Tu Guangliang et al.(1983) rapportearre dat in giftige PLA mei in isoelectric punt fan 7. 6 waard isolearre en suvere út it venom fan Vipera rotundus út Fujian, en syn fysike en gemyske eigenskippen, amino acid gearstalling en de folchoarder fan 22 amino acid resten oan de N -terminal waarden bepaald.Li Yuesheng et al.(1985) isolearre en suvere in oare PLA2 út it gif fan Viper rotundus yn Fujian.De subunit fan 'e PLA2 * is 13 800, it isoelektryske punt is 10,4, en de spesifike aktiviteit is 35/xnioI/miri mg. LD5 ynjeksje intraveneus yn mûzen.It is 0,5 ± 0,12 mg/kg.Dit enzyme hat dúdlik anticoagulant en hemolytic effekten.It giftige PLA2-molekule bestiet út 123 resten fan 18 soarten aminosoeren.De molekule is ryk oan cysteine (14), asparaginsûr (14) en glycine (12), mar befettet mar ien methionine, en syn N-terminal is serine residu.Yn ferliking mei PLA2 isolearre troch Tuguang, it molekulêre gewicht en it oantal aminosoeren residuen fan de twa isoenzymes binne hiel ferlykber, en de amino acid gearstalling is ek hiel ferlykbere, mar it oantal asparaginezuur en proline residuen is wat oars.Guangxi king cobra slangegif befettet ryk PLA2.Shu Yuyan et al.(1989) isolearre in PLA2 út it gif, dat hat in spesifike aktiviteit 3,6 kear heger as it oarspronklike gif, in molekulêre gewicht fan 13000, in gearstalling fan 122 aminosoeren residuen, in isoelektrysk punt fan 8,9, en goede termyske stabiliteit.Ut de elektroanemikroskoop observaasje fan it effekt fan basis PLA2 op reade bloedsellen, kin sjoen wurde dat it hat dúdlik effekt op minsklik reade bloedsellen membraan, mar hat gjin dúdlik effekt op geit reade bloedsellen.Dizze PLA2 hat dúdlik retarderingseffekt op 'e elektroforetyske snelheid fan reade bloedsellen yn minsken, geiten, kninen en cavia's.Chen et al.Dit enzyme kin bloedplaatjesaggregaasje ynhibearje troch ADP, kollagen en natriumarachidonsûr.As PLA2-konsintraasje 10/xg/ml~lOOjug/ml is, wurdt bloedplaatjesaggregation folslein ynhibeare.As wosken bloedplaatjes waarden brûkt as materialen, koe PLA2 de aggregaasje net ynhiberje by de konsintraasje fan 20Mg / ml.Aspirine is in ynhibitor fan cyclooxygenase, dy't it effekt fan PLA2 op bloedplaatjes kin remme.PLA2 kin bloedplaatjesaggregaasje ynhibearje troch arachidonsoer te hydrolysearjen om thromboxane A2 te synthetisearjen.De oplossingskonformaasje fan PLA2 produsearre troch Agkistrodon halys Pallas venom yn 'e provinsje Zhejiang waard studearre troch middel fan sirkulêre dichroïsme, fluoreszinsje en UV-absorption.De eksperimintele resultaten lieten sjen dat de haadketenkonformaasje fan dit enzyme fergelykber wie mei dy fan deselde soarte enzyme fan oare soarten en genera, de skeletkonformaasje hie goede waarmtebestriding, en de strukturele feroaring yn soere omjouwing wie omkearber.De kombinaasje fan aktivator Ca2+ en enzyme hat gjin ynfloed op it miljeu fan tryptofan-residuen, wylst de inhibitor Zn2+ it tsjinoerstelde docht.De manier wêrop pH-wearde fan oplossing enzymaktiviteit beynfloedet is oars as de boppesteande reagentia.
Yn it proses fan PLA2 suvering fan slangegif is in fanselssprekkend ferskynsel dat in slangegif twa of mear PLA2-elueringspieken befettet.Dit ferskynsel kin as folget ferklearre wurde: ① troch it bestean fan isozymen;② Ien soarte fan PLA2 wurdt polymerisearre yn in ferskaat oan PLA2-mingen mei ferskate molekulêre gewichten, wêrfan de measten yn it berik fan 9 000 ~ 40 000 binne;③ De kombinaasje fan PLA2 en oare komponinten fan slanggif komplisearret PLA2;④ Om't de amidebân yn PLA2 wurdt hydrolysearre, feroaret de lading.① En ② binne gewoan, mei mar in pear útsûnderings, lykas PLA2 yn CrWa/w snake venom
Der binne twa situaasjes: ① en ②.De tredde betingst is fûn yn PLA2 yn it gif fan de folgjende slangen: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a ^>er, Palestynske adder, sânadder, en ferskriklike rattleslang km.
It resultaat fan gefal ④ makket de migraasjesnelheid fan PLA2 te feroarjen tidens elektroforese, mar de aminosoerkomposysje feroaret net.Peptiden kinne troch hydrolyse brutsen wurde, mar oer it generaal binne se noch troch disulfidebânen bûn.It gif fan 'e eastlike pit-rattlesnake befettet twa foarmen fan PLA2, respektivelik type a en type p PLA2 neamd.It ferskil tusken dizze twa soarten PLA2 is mar ien aminosoer, dat is, glutamine yn ien PLA2-molekule wurdt ferfongen troch glutaminesoer yn 'e oare PLA2-molekule.Hoewol de krekte reden foar dit ferskil net dúdlik is, wurdt it algemien leaud dat it relatearre is oan de deaminaasje fan PLA2.As PLA2 yn it Palestynske vipergif waarm wurdt mei it rûge gif, sille de eingroepen yn syn enzymmolekulen mear wurde as earder.Fan C PLA2 isolearre út snake venom hat twa ferskillende N-terminal, en syn molekulêre gewicht is 30000. Dit ferskynsel kin wurde feroarsake troch de asymmetryske dimer fan PLA2, dat is fergelykber mei de symmetryske dimer foarme troch PLA2 yn it gif fan eastlike diamondback rattleslang en westlike diamondback rattlesnake.De Aziatyske kobra is gearstald út in protte ûndersoarten, wêrfan guon net hiel definityf binne yn klassifikaasje.Bygelyks, wat eartiids de Cobra Bûten Kaspyske ûndersoarten neamd waard, wurdt no erkend
It moat wurde taskreaun oan de Cobra fan 'e Bûten Kaspyske See.Om't der in protte ûndersoarten binne en se meiinoar mingd binne, feroaret de gearstalling fan slangegif sterk troch ferskate boarnen, en de ynhâld fan PLA2-isozymen is ek heech.Bygelyks, cobra venom
Op syn minst 9 soarten PLA2-isozymen fan r ^ ll soarten waarden fûn yn, en 7 soarten PLA2-isozymen waarden fûn yn it gif fan cobra-ûndersoarten Kaspyske.Durkin et al.(1981) studearre de PLA2-ynhâld en it oantal isozymen yn ferskate slangegifen, wêrûnder 18 kobra-gif, 3 mamba-gif, 5 viper-gif, 16 rattleslang-gif en 3 seeslang-gif.Yn 't algemien is de PLA2-aktiviteit fan cobra-gif heech, mei in protte isozymen.De PLA2-aktiviteit en isozymen fan vipergif binne medium.De PLA2-aktiviteit fan mamba-gif en rattlesnake-gif is heul leech as gjin PLA2-aktiviteit.De PLA2-aktiviteit fan seeslanggif is ek leech.
De lêste jierren is net rapportearre dat PLA2 yn slangegif bestiet yn 'e foarm fan aktive dimer, lykas de eastlike rhombophora rattlesnake (C. snake venom befettet type a en type P PLA2, dy't beide binne gearstald út twa identike subunits , en allinnich dimerase hat
Aktiviteit.Shen et al.ek foarstelde dat allinich de dimer fan PLA2 fan it slanggif de aktive foarm fan it enzyme is.De stúdzje fan romtlike struktuer bewiist ek dat PLA2 fan westlike diamondback rattlesnake bestiet yn 'e foarm fan dimer.Piscivorous gearstalling
D'r binne twa ferskillende PLA ^ Ei en E2 fan slangegif, wêryn 仏 bestiet yn 'e foarm fan dimear, de dimeer aktyf is, en syn dissosjearre monomer is ynaktyf.Lu Yinghua et al.(1980) studearre fierder de fysike en gemyske eigenskippen en reaksjekinetika fan E. Jayanthi et al.(1989) isolearre in basis PLA2 (VRVPL-V) fan it vipergif.It molekulêre gewicht fan it monomer PLA2 is 10000, dat deadlike, antikoagulant en oedeem-effekten hat.It enzyme kin polymerisearje polymers mei ferskillende molekulêre gewichten ûnder de betingst fan PH 4.8, en de graad fan polymerization en molekulêre gewicht fan polymers tanimme mei de tanimming fan temperatuer.It molekulêre gewicht fan it polymeer generearre by 96 ° C is 53 100, en de PLA2-aktiviteit fan dit polymeer nimt ta mei twa
Post tiid: Nov-18-2022